Niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab indukcja płytek krwi przez nadtlenek wymaga 12-lipooksygenazy i szlaku oksydazy płytkowej NADPH czesc 4

W przeciwieństwie do tego, nieabiologiczny stereoizomer, 12 (R) -HETE, był bezskuteczny w tym teście, podobnie jak produkt 5-LO granulocytów, LTB4 (dane nie pokazane), co wskazuje na swoistość. Po drugie, potwierdzając związek pomiędzy 12-LO a układem oksydazy NADPH, ustaliliśmy, że podobnie jak Ab od pacjentów HIV-1-ITP, tylko 12 (S) -HETE (200 nM) było wystarczających do indukowania translokacji p47phox i p67phox do błon płytkowych (rysunek 3D). Jak przewidywano na podstawie fig. 2, indukowana translokacja 12 (S) -HETEa była również hamowana przez inhibitor kinazy białkowej C, bisindolylomaleimid (Figura 3D). Ponadto, przebiegi czasowe fragmentacji płytek krwi indukowane przez pacjenta albo anty-GPIIIa49 . Continue reading „Niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab indukcja płytek krwi przez nadtlenek wymaga 12-lipooksygenazy i szlaku oksydazy płytkowej NADPH czesc 4”

Niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab indukcja płytek krwi przez nadtlenek wymaga 12-lipooksygenazy i szlaku oksydazy płytkowej NADPH cd

Fragmentację płytek monitorowano za pomocą cytometrii przepływowej płytek krwi znakowanych przeciwciałem anty-CD41-FITC. Fragmenty płytek krwi monitorowano przez wyliczanie fluorescencyjnych cząstek w bramkach ustalonych w celu wykrycia mniejszych cząstek. A, n = 4; B, n = 4; C, n = 3; D, n = 6. indukowana przez Ab aktywacja funkcjonalna szlaku oksydazy NADPH. Płytki krwi inkubowano z Ab oczyszczonym od osób kontrolnych lub od pacjentów z HIV-1-ITP. Continue reading „Niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab indukcja płytek krwi przez nadtlenek wymaga 12-lipooksygenazy i szlaku oksydazy płytkowej NADPH cd”

Niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab indukcja płytek krwi przez nadtlenek wymaga 12-lipooksygenazy i szlaku oksydazy płytkowej NADPH ad

Związek pomiędzy LTB4 i oksydazą NADPH jest nieznany. Tutaj (a) pokazujemy, że płytki mają funkcjonalny szlak oksydazy NADPH; (b) wskazują, że szlak jest aktywowany przez zakłócenie błonowe GPIIIa49a 66; i (c) opisują nową drogę ROS, w której 12 (S) -HETE, produkt 12-lipooksygenazy płytkowej (12-LO), aktywuje oksydazę NADPH po ligacji GPIIIa49 . 66. Tak więc, niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab fragmentacja płytek krwi poprzez wytwarzanie oksydazy NADPH z ROS wymaga aktywacji płytki 12-LO. Wyniki Brak granulocytów w preparatach płytek krwi filtrowanych żelem. Continue reading „Niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab indukcja płytek krwi przez nadtlenek wymaga 12-lipooksygenazy i szlaku oksydazy płytkowej NADPH ad”

Niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab indukcja płytek krwi przez nadtlenek wymaga 12-lipooksygenazy i szlaku oksydazy płytkowej NADPH

Antypłytkowe GPIIIa49 . 66 Ab pacjentów z małopłytkowością związaną z HIV indukuje trombocytopenię i fragmentację płytek krwi przez wytwarzanie nadtlenku i innych reaktywnych form tlenu (ROS). Poniżej przedstawiamy obecność funkcjonalnego szlaku płytkowej oksydazy NADPH, który wymaga aktywacji szlakiem 12-lipooksygenazy (12-LO) płytek krwi w celu fragmentacji płytek krwi. Opisano nowy mechanizm za pośrednictwem Ab, w którym produkt płytkowy 12-LO, 12 (S) -HETE aktywuje szlak oksydazy NADPH do generowania ROS. Wprowadzenie Pacjenci z zakażeniem HIV-1 często rozwijają małopłytkowość immunologiczną (HIV-1-ITP) (1). Continue reading „Niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab indukcja płytek krwi przez nadtlenek wymaga 12-lipooksygenazy i szlaku oksydazy płytkowej NADPH”

Pozytywna pętla sprzężenia zwrotnego FGFR3 / FOXN1 leży u podłoża łagodnego rogowacenia skóry w porównaniu z powstawaniem raka płaskokomórkowego u ludzi ad

Co ważne, identyczne mutacje FGFR3 były również związane z innymi nowotworami nabłonkowymi, w tym rakiem pęcherza, z dobrym rokowaniem i brakiem złośliwej progresji (27-29). Odwrotnie, te same aktywacje FGFR3 powiązano z progresją choroby niektórych nowotworów krwiotwórczych, w tym szpiczaka mnogiego (30, 31). Podstawa dla tych specyficznych dla komórek typu konsekwencji aktywacji FGFR3 na rozwój nowotworu pozostaje wyjaśniona. FOXN1 jest członkiem rodziny czynnika transkrypcji, który pełni zasadniczą funkcję w różnicowaniu keratynocytów (32. 35) i rozwoju nabłonka grasicy (36), z mutacjami genu FOXN1, co skutkuje nagim fenotypem u myszy, szczurów i ludzi (37. Continue reading „Pozytywna pętla sprzężenia zwrotnego FGFR3 / FOXN1 leży u podłoża łagodnego rogowacenia skóry w porównaniu z powstawaniem raka płaskokomórkowego u ludzi ad”

Pozytywna pętla sprzężenia zwrotnego FGFR3 / FOXN1 leży u podłoża łagodnego rogowacenia skóry w porównaniu z powstawaniem raka płaskokomórkowego u ludzi

Łojotokowe rogowacenia (SK) są częstymi, łagodnymi nowotworami nabłonkowymi skóry, które nie są lub bardzo rzadko postępują z nowotworami z powodów, które nie są zrozumiałe. Zbadaliśmy to poprzez profilowanie ekspresji genów ludzkich SK i raków skóry płaskonabłonkowej (SCC) i odkryliśmy, że kilka genów uprzednio związanych z rozwojem guza keratynocytów było podobnie modulowanych w SK i SCC, podczas gdy ekspresja innych różniła się zaledwie kilkukrotnie. W przeciwieństwie do tego receptor receptora kinazy tyrozynowej, receptor FGF. 3 (FGFR3) i czynnik wideotransferowy N1 (FOXN1) ulegały silnej ekspresji w SK i prawie niewykrywalne w SCC. Wykazaliśmy również, że zwiększona aktywność FGFR3 była wystarczająca do indukcji ekspresji FOXN1, przeciwdziałania hamującemu działaniu sygnalizacji EGFR na ekspresję FOXN1 i różnicowaniu oraz indukowaniu różnicowania w sposób zależny od FOXN1. Continue reading „Pozytywna pętla sprzężenia zwrotnego FGFR3 / FOXN1 leży u podłoża łagodnego rogowacenia skóry w porównaniu z powstawaniem raka płaskokomórkowego u ludzi”

Niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab indukcja płytek krwi przez nadtlenek wymaga 12-lipooksygenazy i szlaku oksydazy płytkowej NADPH ad 8

Supernatant odwirowano następnie przy 30 000 g przez godzinę i osad membranowy ponownie zawieszono w początkowej zawiesinie 0,34 M buforu relaksacyjnego sacharozy / pół-siły zawierającego mM DTT. Cytosol i membrany przechowywano w temperaturze około 70 ° C. P47phox, p67phox i cPLA2 były następnie testowane za pomocą analizy immunoblotów ze specyficznym Ab, a następnie odpowiednim drugorzędowym Ab połączonym z HRP (Santa Cruz Biotechnology Inc.). Bloty zostały opracowane przez chemiluminescencję. Pomiar markera cytosolowego, dehydrogenazy mlekowej, ujawnił, że frakcje błonowe zawierały minimalne pułapkowanie całkowitej LDH (9,5%. Continue reading „Niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab indukcja płytek krwi przez nadtlenek wymaga 12-lipooksygenazy i szlaku oksydazy płytkowej NADPH ad 8”

Niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab indukcja płytek krwi przez nadtlenek wymaga 12-lipooksygenazy i szlaku oksydazy płytkowej NADPH ad 7

Supernatant najpierw potraktowano obj. Wody destylowanej przez 60 sekund w celu usunięcia zanieczyszczających czerwonych ciałek krwi, a następnie 4 objętości 4,25% NaCl dla osiągnięcia izotoniczności. Supernatant następnie odwirowano i osad komórek przemyto i zawieszono w 1: 5 objętości buforu Tyrode a. Indukcja cząstek płytek krwi. Ludzkie płytki z filtrem żelowym przygotowano z krwi pobranej w 5,2 mM EDTA. Continue reading „Niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab indukcja płytek krwi przez nadtlenek wymaga 12-lipooksygenazy i szlaku oksydazy płytkowej NADPH ad 7”

Niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab indukcja płytek krwi przez nadtlenek wymaga 12-lipooksygenazy i szlaku oksydazy płytkowej NADPH ad 6

Jednak wydaje się, że komórki niefagocytujące wyrażają ten szlak oksydazy NADPH. Tak więc, obecność, jak również względna rola różnych szlaków, jest niejasna, a dalsze zdarzenia związane z wiązaniem receptora z indukcją ROS są nieznane. Nasze aktualne dane dostarczają wyjaśnienia dla tych obserwacji, wykazując, że zarówno szlaki 12-LO i oksydazy NADPH są połączone ze szlakiem 12-LO płytek krwi przed ścieżką oksydazy NADPH. Potwierdzają to nasze obserwacje, że produkt 12-LO, 12 (S) -HETE, indukuje fragmentację płytek nawet w płytkach krwi u zwierząt z niedoborem 12-LO. To, że jest to specyficzna ścieżka związana z generacją 12 (S) -HETE, jest podkreślane przez fakt, że indukowana przez Ab fragmentacja płytek krwi jest normalna w przypadku płytek krwi od myszy z niedoborem 5-LO2 i obserwowanej niezdolności 12 (R) – HETE, syntetyczny stereoizomer biologicznie aktywnego lipidu, do indukowania fragmentacji płytek krwi. Continue reading „Niezależna od dopełniacza indukowana przez Ab indukcja płytek krwi przez nadtlenek wymaga 12-lipooksygenazy i szlaku oksydazy płytkowej NADPH ad 6”

Pozytywna pętla sprzężenia zwrotnego FGFR3 / FOXN1 leży u podłoża łagodnego rogowacenia skóry w porównaniu z powstawaniem raka płaskokomórkowego u ludzi ad 7

Nasze odkrycia ustanawiają FOXN1 jako induktora tego genu, który jest podobny do wzmacniającego wpływu na różnicowanie. Powstała pętla pozytywnego sprzężenia zwrotnego. w którym aktywujące mutacje FGFR3 indukują ekspresję FOXN1, co z kolei prowadzi do podwyższonej ekspresji FGFR3. może zapewnić, że dotknięte keratynocyty są zablokowane w trybie prodifferentiation, który zapobiega ich złośliwemu progresji. Wskazuje to na możliwie ogólne podejście do powstrzymywania złośliwych guzów poprzez zmianę ich wzorca ekspresji genów w kierunku obserwowanego w odpowiadających łagodnych zmianach. Continue reading „Pozytywna pętla sprzężenia zwrotnego FGFR3 / FOXN1 leży u podłoża łagodnego rogowacenia skóry w porównaniu z powstawaniem raka płaskokomórkowego u ludzi ad 7”