Komórki macierzyste w inicjacji i progresji nowotworu prostaty ad 6

Komórki nabłonkowe z wielu narządów, takich jak skóra i gruczoł mleczny, mogą być hodowane jako kolonie w dwuwymiarowych warunkach hodowli (35, 63). Ludzkie komórki nabłonkowe gruczołu krokowego można również hodować w ten sposób, gdy są wspólnie hodowane z napromienionymi warstwami nośnika fibroblastów w pożywce wolnej od wapnia, pozbawionej surowicy zawierającej czynniki wzrostu, takie jak FGF i EGF, o których wiadomo, że wspomagają utrzymanie komórek macierzystych (31). W tych warunkach mysie komórki nabłonkowe prostaty tworzą kolonie komórek, które eksprymują nabłonkowe cytokeratyny podczas hodowli z napromieniowanymi komórkami komórek 3T3 (64). Kolonie te wydają się być klonogenne, ponieważ eksperymenty z różnicowaniem wykazały, że rzadko pojawiają się kolonie chimeryczne. Pokazano także, że kastracja wzbogaca się w komórki tworzące kolonie, co sugeruje, że kolonie powstają głównie z pierwotnego nabłonka prostaty. Odkrycia te wykazują, że test ten można wykorzystać do ilościowego porównania strategii wzbogacania komórek macierzystych. Testy sfery prostaty in vitro. Chociaż wydaje się, że kolonie pochodzą z komórek pierwotnych, nie przechodzą one skutecznie, ponieważ wydaje się, że ten stan hodowli sprzyja różnicowaniu. Komórki macierzyste z ośrodkowego układu nerwowego i gruczołu mlekowego utrzymywano przez hodowanie ich w warunkach nieprzylegających w postaci trójwymiarowych sfer (65, 66). Linie ludzkich komórek raka prostaty i unieśmiertelnione linie normalnych komórek mogą tworzyć struktury sferoidalne, gdy są wbudowane w solubilizowany preparat błony podstawnej o nazwie Matrigel (67. 69). Opracowaliśmy test mysiego sferycznego prostaty, stosując podobne warunki (64). Większość kulek generowanych w tych warunkach składa się z kilku warstw komórek nabłonkowych otaczających pusty ośrodek. Spekulujemy, że jest to analogiczne do procesu kanalizacji, który pojawia się podczas rozwoju kanału prostaty. Podobnie jak w przypadku testu kolonii, badania różnicujące i kastracyjne wykazały, że sfery prostaty pochodzą z klonów i pochodzą z komórek pierwotnych (64). Sfery mogą być rozdzielane i pasażowane przez ponad 10 pokoleń, co sugeruje, że zawierają one populację komórek o dużej zdolności samoodnawiania się (64). Jednak sama odnawiająca się populacja wydaje się być mniejszością, ponieważ tylko 1%. 2% komórek sferycznych tworzy nowe sfery po replicate. Wszczepienie komórek sfery w badaniu regeneracji kapsułek nerkowych wykazało, że zarówno pierwotne, jak i pasażowane komórki kuliste mogą regenerować struktury przewodów prostaty zawierające zarówno komórki podstawowe, jak i komórkowe (64). Te dane sugerują, że mysie PSC są zdolne do rozległej samoodnowy i że ta aktywność może być utrzymywana za pomocą tego testu sfery prostaty. Identyfikacja i charakterystyka komórek macierzystych nabłonka gruczołu krokowego Tradycyjne metody izolowania tkankowych komórek macierzystych wykorzystują markery powierzchni komórkowej i technologię sortowania komórek. Stosując to podejście, Collins i jego współpracownicy (70) wykazali, że podstawowe komórki gruczołu krokowego, które szybko przylegają do kolagenu typu I in vitro eksprymują wysokie poziomy integryny a2 (3, mają większą skuteczność tworzenia kolonii in vitro i mogą wytwarzać gruczołowe struktury gruczołu krokowego, gdy wszczepione na boki bezgrasiczych myszy. Podział przedziału komórek podstawnych a | 3 | 1hi przy użyciu CD133, neuronowego i hematopoetycznego markera komórek macierzystych, powoduje 11-krotny wzrost tworzenia kolonii (71). Te komórki CD133 + A 2 (3hi mogą również dawać tkankę gruczołową in vivo. Niezależne badania przeprowadzone przez nasze laboratorium i Burger i in. (72) wykazali, że Sca-1, marker stosowany do wzbogacania krwiotwórczych, sutkowych i płucnych komórek macierzystych, może być stosowany do wzbogacania mysich komórek gruczołu krokowego ze zwiększoną aktywnością kanalików in vivo (61, 72. 75). Komórki Sca-1 + mają kilka właściwości komórek macierzystych, w tym zdolność różnicowania wieloliniowego i spoczynkową replikację (61). Sca-1 wydaje się również obecny w większości pierwotnych komórek, które pozostają po apoptozie wywołanej kastracją dojrzałych komórek prostaty. Stwierdziliśmy również, że Sca-1 ulega konstytucyjnej ekspresji we wszystkich komórkach nabłonkowych prostaty płodowej, co wskazuje, że marker jest obecny na PSC od bardzo wczesnych etapów ich rozwoju (62). Wilson i współpracownicy wykazali, że komórki prostaty Sca-1 + eksprymują inne markery komórek macierzystych, takie jak BCL-2 i CD49f (integryna a6) (72). CD49f jest szczególnie rozpowszechnionym markerem komórek macierzystych, który jest wyrażany przez hematopoetyczne, nerwowe, zarodkowe, skóry i nabłonkowe komórki macierzyste sutka (76. 80). Sortowanie kulek magnetycznych dla komórek CD49f + wzbogaca komórki o zwiększonej aktywności regeneracyjnej in vivo (30). Wykazaliśmy, że łączenie tych markerów w celu sortowania komórek z profilem antygenowym Lin (CD45 / CD31 / Ter119) aSca-1 + CD49f + (LSC) daje 60-krotne wzbogacenie dla komórek tworzących kolonie i kulki in vitro ( 64)
[patrz też: powiększanie biustu tłuszczem, zapalenie migdałków jak leczyć, chipsy ziemniaczane z piekarnika ]
[podobne: miód nawłociowy właściwości lecznicze, zapalenie stawów u dziecka, dieta wątrobowa lekkostrawna ]