Hamowanie proteasomu zmniejsza aktywację limfocytów T za pośrednictwem superantygenu i nasilenie łuszczycy w modelu SCID-hu ad 5

W związku z tym przeanalizowaliśmy wpływ PS-519 na proliferację i aktywację limfocytów T w komórkach stymulowanych superantygenem. TSST-1 indukował 28-krotny wzrost włączania 3H-tymidyny, który był hamowany w sposób zależny od dawki przez PS-519 i osiągał maksimum przy 2,5 ug / ml. Wskaźniki stymulacji były następujące: niestymulowane komórki, 1; TSST-1 (3 stymulowane komórki, 28,13. 3,30; komórki stymulowane TSST-1 i PS-519 (2,5 .g / ml), 1,65. 1,81 (rysunek 2). Proliferacja niestymulowanych komórek hodowanych w obecności PS-519 (0.25. 2.5. G / ml) pozostała niezmieniona (Figura 2). Stosując testy wykluczania błękitem trypanowym i wychwytu jodku propidyny, wyłączono toksyczne efekty PS-519 jako możliwej przyczyny zmniejszonej proliferacji limfocytów T (dane nie pokazane). Figura 2PS-519 hamuje proliferację komórek T indukowaną TSST-1 (3. PBMC (2 x 106 / ml) otrzymane od pięciu zdrowych ochotników stymulowano TSST-1 (100 ng / ml) pod nieobecność lub obecność PS-519 (0,25 . 2,5 ug / ml) przez 4 dni, a następnie pulsowano za pomocą 3H-tymidyna. Włączenie 3H-tymidyny do DNA obliczono stosując ciekły licznik scyntylacyjny. Wskaźnik stymulacji obliczono na podstawie stosunku: zaniki na minutę eksperymentalnej grupy / zaniki na minutę grupy kontrolnej. Otwarte symbole przedstawiają spoczynkowe PBMC, wypełnione symbole stymulowane TSST-1 (3 PBMC. Zaobserwowano znaczące zmniejszenie proliferacji, począwszy od 0,25 .g / ml PS-519 (* P <0,001). Wartości reprezentują średnią. SD pięciu zdrowych dawców. PS-519 hamuje indukowaną TSST-1 (3 ekspresję cząsteczek aktywujących komórki T. Ponieważ superantygeny są silnymi aktywatorami komórek T, a aktywowane limfocyty T są zaangażowane w utrzymywanie łuszczycowych zmian skórnych, badaliśmy wpływ inhibitora proteasomu PS-519 na aktywację limfocytów T za pośrednictwem superantygenu. W tym celu wybraliśmy marker wczesnej aktywacji CD69, marker wczesnej aktywacji CD25 i marker późnej aktywacji HLA-DR, które wszystkie znajdują się pod kontrolą transkrypcyjną NF-kB (15, 25, 44, 45). W komórkach stymulowanych TSST-1 (3, ekspresja CD69 wzrosła około czterokrotnie w dniu (niestymulowane komórki 9,62%. 5,25% w porównaniu do komórek stymulowanych TSST-1 (3 43,89%. 10,14%) i pozostała niezmieniona przez 5 dni. PS-519 znacząco i zależnie od dawki zmniejszał ekspresję CD69 przez limfocyty T do 40% (Figura 3a). Ekspresja CD25 przez limfocyty T ciągle wzrastała, osiągając plateau w dniu 5 stymulacji TSST-1 (dzień 5: niestymulowane komórki 8,32%. 2,29% versus komórki stymulowane TSST-1 (3 53,34%. 2,99%) i pozostawały stabilne aż do dnia 9 ( dane nie pokazane). Ponownie, PS-519 indukował zależne od dawki hamowanie tego markera aktywacyjnego z całkowitym zahamowaniem regulacji upakowania CD25 przy 2,5 ug / ml (Figura 3b). Ekspresja HLA-DR przez komórki T stymulowane TSST-1 (3 osiągnęła maksimum w dniu 5 (niestymulowane komórki 21,79%. 3,41% w porównaniu z komórkami stymulowanymi TSST-1 (3 51,79%. 12,26%) ze spadkiem w dniu 9 (dane nie pokazane). Ekspresja HLA-DR przez komórki T leczone w obecności PS-519 była znacznie zmniejszona nawet w porównaniu z niestymulowanymi komórkami (5,81% <4,40%, P <0,01, Figura 3c). Figura 3PS-519 hamuje indukowaną TSST-1 (3 ekspresję cząsteczek aktywujących komórki T. PBMC stymulowano TSST-1 (100 ng / ml) w obecności lub nieobecności PS-519 (0.25. 2.5. G / ml). Ekspresję powierzchniową CD69 + CD3 + (a), CD25 + CD3 + (b) i HLA-DR + CD3 + (c) mierzono w dniach 1, 3, 5, 7 i 9 (dni 7 i 9 nie pokazano) za pomocą cytometrii przepływowej. Odpowiednie izotypy Ig służyły jako kontrole do ustawiania bramek do barwienia pozytywnego i negatywnego. W celu ekspresji CD69 zaobserwowano znaczącą redukcję w dniu 1, rozpoczynając od 1,0 .g / ml (P <0,05), oraz w dniach 3 i 5 rozpoczynając od 0,5 .g / ml PS-519 (odpowiednio P <0,001 i P <0,05). ). W celu ekspresji CD25 zaobserwowano znaczącą redukcję w dniu 3, rozpoczynając od 1,0 .g / ml (P <0,001), iw dniu 5 rozpoczynając od 0,25 .g / ml PS-519 (P <0,001). W celu ekspresji HLA-DR zaobserwowano znaczące zmniejszenie w dniu przy 2,5 ug / ml (P <0,05), w dniu 3 zaczynając od 1,0 ug / ml (P <0,05), a w dniu 5 zaczynając od 0,25. G / ml PS-519 (P <0,001). Dane reprezentują środki pięciu eksperymentów. SD. PS-519 hamuje indukowaną TSST-1 (3 ekspresję cząsteczek naprowadzających komórki T. Recyrkulacja aktywowanych komórek T do skóry ma kluczowe znaczenie zarówno w nadzorze immunologicznym, jak iw zaburzeniach zapalnych zależnych od limfocytów T, takich jak łuszczyca. W związku z tym zbadaliśmy wpływ PS-519 na indukowaną przez TSST-1 a regulację w górę cząsteczek, o których wiadomo, że są wyrażane przez komórki T poszukujące skóry. Ekspresja CLA i blisko spokrewnionego ugrupowania sialil LewisX (sLeX = CD15s) jest indukowana przez superantygeny (2, 4, 46). Jak opisano, zaobserwowaliśmy maksymalną indukcję obu antygenów w dniu 5 stymulacji TSST-1 (komórki CLA: kontrolne 14,57%. 2,52% w porównaniu z komórkami stymulowanymi TSST-1 (3, 35,67%. 5,63%, CD15s: komórki kontrolne 15,31%. 1,99 % względem komórek stymulowanych TSST-1 (3 50,19%. 2,51%) [przypisy: gops jabłonna, dieta wątrobowa lekkostrawna, sok z czarnego bzu przepis ] [więcej w: szczoteczka soniczna oral b, przychodnia jabłonna, pierwsze posiłki niemowlaka ]