Antagonista receptora chemokin CCR-1 zmniejsza zwłóknienie nerek po jednostronnej podwiązaniu moczowodu

Uważa się, że ekspresja chemokin i ich receptorów przyczynia się do infiltracji leukocytów i postępującego zwłóknienia nerek po jednostronnej obturacji moczowodu (UUO). Postawiliśmy hipotezę, że blokowanie receptora chemicznego CCR1 przy użyciu niepeptydowego antagonisty BX471 może zmniejszyć infiltrację leukocytów i zwłóknienie nerek po UUO. Nerki UUO myszy leczonych BX471 (dzień 0. 10 i dzień 6. 10) wykazały 40. 60% zmniejszenie śródmiąższowego makrofagów i nacieków limfocytów w porównaniu z kontrolami. Traktowane myszy również wykazały znaczną redukcję poziomów mRNA dla CCR1 i CCR5, a analiza FACS wykazała porównywalną redukcję limfocytów T CD8 + / CCR5 +. Znaczniki zwłóknienia nerek, takie jak śródmiąższowe fibroblasty, objętość śródmiąższowa, ekspresja mRNA i białka dla kolagenu I, wszystkie były znacząco zmniejszone przez leczenie BX471 w porównaniu z kontrolnymi nośnikami. Z kolei leczenie było nieskuteczne, gdy lek podawano tylko od 0 do 5. Podsumowując, blokada CCR1 zasadniczo zmniejsza akumulację komórek i zwłóknienie nerki po UUO. Co najciekawsze, skuteczny jest również późny początek leczenia. Wnioskujemy zatem, że blokada CCR1 może reprezentować nową strategię terapeutyczną zmniejszania infiltracji komórek i zwłóknienia nerek jako głównych czynników progresji do krańcowej niewydolności nerek. Wstęp Postępujące zwłóknienie prowadzące do utraty czynności narządów jest nierozwiązanym problemem w medycynie klinicznej. W nerkach zwłóknienie kanalikowo-śródmiąższowe jest głównym predyktorem progresji do schyłkowej niewydolności nerek (1). Zwłóknienie nerek charakteryzuje się mieszanym naciekiem komórek leukocytów kanalikowych, proliferacją fibroblastów i zwiększonym wytwarzaniem macierzy prowadzącym do martwicy komórek kanalików i apoptozy (2). Podczas tego procesu infiltracja makrofagów i limfocytów jest głównym źródłem mediatorów stanu zapalnego, takich jak cytokiny, tlenek azotu i czynniki wzrostu. Hamowanie naciekania leukocytów może zmniejszyć wytwarzanie takich mediatorów, a zatem może być opcją powstrzymania postępującego zwłóknienia nerek i zapobieżenia lub opóźnienia schyłkowej niewydolności nerek. Infiltracja komórek leukocytarnych jest wyzwalana przez lokalnie wydzielane chemokiny (3). Istnieje coraz więcej dowodów z badań przeprowadzonych na ludzkich biopsjach nerkowych, że ekspresja niektórych receptorów chemokin na powierzchni leukocytów infiltrujących tubulointerstyt odgrywa ważną rolę w progresji choroby nerek (4. 6). Jednostronna niedrożność moczowodu (UUO) jest szeroko stosowanym modelem progresywnego zwłóknienia nerek, które jest niezależne od nadciśnienia lub ogólnoustrojowej choroby immunologicznej (7). Ostatnio scharakteryzowaliśmy ekspresję chemokin i ich odpowiednich receptorów podczas postępującego zwłóknienia nerki po UUO u myszy (8). Stwierdziliśmy, że rosnące ilości receptora CC-chemokiny-1 (CCR1), jak również jego ligandów chemokinowych RANTES / CCL5, MIP-1 (3 / CCL3 i MIP-1 (3 / CCL4, ulegały ekspresji równolegle z progresją zwłóknienie nerek. Ponieważ wiadomo, że CCR1 pośredniczy w migracji limfocytów i makrofagów do tkanki objętej procesem zapalnym, CCR1 okazał się obiecującym celem strategii blokowania (3). Ostatnio opracowano silną serię antagonistów CCR1, która jest również skuteczna w stosunku do gryzoni CCR1. Związek wiodący BX471. 5-chloro-2- (2 – [(2R) -4- (4-fluorobenzylo) -2-metylopiperazyn-1-ylo] -2-oksoetoksy-fenylo) mocznik sól chlorowodorkowa. jest obecnie w fazie I badań na ludziach i wykazano, że skutecznie łagodzi on chorobę w modelu eksperymentalnego alergicznego zapalenia mózgu i rdzenia u szczurów i opóźnia odrzucenie przeszczepu nerki serca i królików nerkowych (9. 11). Dlatego postawiliśmy hipotezę, że blokowanie CCR1 za pomocą BX471 może zmniejszyć infiltrację leukocytów i zwłóknienie nerek po UUO, co jest hipotezą potwierdzoną przez nasze wyniki. Metody Linie komórkowe i komórki wyrażające CCR1. Linie komórkowe 293MR (ludzkie komórki CCR1 / 293) i 293M3X (mysie komórki CCR1 / 293) opisano wcześniej (12, 13). Linię komórkową 293M3X / pEAK10-Gqi5 wytworzono przez transfekcję komórek 293M3X plazmidem pEAK10-Gqi5 przy użyciu Lipofectamine (Life Technologies Inc., Carlsbad, California, USA) i wybranie 0,5. G / ml puromycyny (Edge BioSystems Inc., Gaithersburg , Maryland, USA). pEAK10-Gqi5 kieruje nadekspresją chimerycznego białka Gqi5 G, co pozwala na zwiększenie odpowiedzi cytosolowego strumienia wapnia z receptorów sprzężonych z Gi (12, 13). pEAK10-Gqi5 skonstruowano przez ligację fragmentu HinDIII / Notl z plazmidu pLEC-Gqi5-HA (Molecular Devices Corp., Sunnyvale, Kalifornia, USA) do strawionego HinDII / Notl . pEAK10 (Edge BioSystems Inc.). Badania wiązania chemokiny. Komórki HEK 293 stabilnie wyrażające ludzką (293MR) lub mysią (293M3X) CCR1 hodowano do konfluentnych monowarstw w kolbach kwadratowych centymetra T-225, jak opisano wcześniej (14).
[przypisy: zapalenie gardła u dzieci, gops jabłonna, osobowość paranoiczna test ]
[patrz też: dieta wątrobowa lekkostrawna, królik miniaturka baranek, jarhead żołnierz piechoty morskiej cda ]