Antagonista receptora chemokin CCR-1 zmniejsza zwłóknienie nerek po jednostronnej podwiązaniu moczowodu czesc 4

Gdy podano go osobno, związek nie indukuje przejściowych Ca2 +, co wskazuje, że związek nie wykazuje wewnętrznej aktywności agonistycznej (dane nie pokazane). Figura 2 Pomiary Kmocono Ca2 + w komórkach HEK 293. BX471 hamował zdolność MIP-1 (3 / CCL3 do zwiększania stężeń Ca2 + w komórkach HEK 293 eksprymujących ludzką i mysią CCR1. Komórki obciążone fluo-3 (3 poddano wstępnej obróbce rosnącymi stężeniami BX471 przez 15 minut, a następnie stymulowano agonistą CCR1, MIP-1 (3 / CCL3. Zmiany w fluorescencji odpowiadające zmianom stężenia Ca2 + zmierzono zgodnie ze wskazaniami w Methods. Określenie parametrów farmakokinetycznych u myszy. Profil farmakokinetyczny BX471 zbadano u przytomnych myszy. BX471 podawano myszom w dawce 20 mg / kg w podłożu 40% cyklodekstryny / soli fizjologicznej przez wstrzyknięcie podskórne. Próbki osocza przygotowano jak opisano poprzednio, a stężenia związku w osoczu oznaczono za pomocą HPLC (14). Jak pokazano na Figurze 3, BX471 osiągnął maksymalne poziomy w osoczu wynoszące 9. M przez około 30 minut, a to gwałtownie spadło do około 0,4. M po 2 godzinach. Od 4 do 8 godzin stężenie leku w osoczu spadło do 0,1. M lub mniej. Na podstawie tych danych zdecydowaliśmy się podawać zwierzętom podskórnie trzy razy na dobę 20 mg / kg BX471. Figura 3Pharmakokinetyka BX471 u myszy. Stężenie BX471 w osoczu po podaniu podskórnym myszom. Samce myszy (n = 4) otrzymały pojedynczą dawkę podskórną (20 mg / kg) BX471 w 40% cyklodekstrynie. Poziomy BX471 w osoczu krwi mierzono zgodnie z wcześniejszym opisem (9). Dane są średnie. SEM. Parametry choroby cewkowo-śródmiąższowej po UUO Naciekające leukocyty. W dniu 10 po UUO znaczny naciek komórek z leukocytów CD45-dodatnich, limfocytów CD3-dodatnich i makrofagów dodatnich względem F4 / 80 był zlokalizowany w śródotwiekowej śródmiąższu w kontrolnych podłożach (Figury 4 i 5). Aby dodatkowo scharakteryzować ekspresję receptora chemokinowego nacieku komórkowego, przeprowadziliśmy RT-PCR w czasie rzeczywistym dla CCR1, CCR2 i CCR5 przy użyciu nerkowego RNA. Stwierdzono znaczny wzrost mRNA wszystkich trzech receptorów chemokin w zatkaniu w porównaniu z niezakłóconymi nerkami (Figura 6). Aby scharakteryzować ekspresję receptora na infiltrujących komórkach T, przeprowadzono analizę FACS na izolatach komórek nerkowych; 64% komórek T CD8 infiltrujących zatkane nerki było dodatnich pod względem CCR5 w porównaniu z 42% w przeciwległej nerce (nie pokazano) i 17% w krwi obwodowej (Figura 7). Nerki zdrowych myszy C57BL / 6, którym nie wstrzyknięto nośnika, zawierały 21% komórek T CD8 dodatnich dla CCR5 (nie pokazano). Nie obserwowano wzrostu liczby komórek CD4 pozytywnych względem CCR5 lub komórek CD4 lub CD8 dodatnich pod względem CCR2 w nerkach UUO w porównaniu z przeciwległymi nerkami lub krwią obwodową u myszy z grupy kontrolnej traktowanej nośnikiem. Figura 4 Akumulacja komórek śródmiąższowych po UUO. Ilościowa analiza infiltracji komórek 10 dni po zablokowaniu UUO (czarne słupki) i kontralateralnej bez przeszkód nerek (białe słupki). Wartości to środki. SD zliczeń komórek na hpf. Należy zauważyć, że traktowanie BX471 przez 10 dni, a także od dni 6. 10 zmniejszało naciekanie leukocytów CD45 +, limfocytów CD3 +, makrofagów F4 / 80 + i fibroblastów FSP1 + w porównaniu z kontrolami nośnika. BX471 podawany od 0 do 5 nie wywierał żadnego działania. * P <0,05. Ryc. 5 Infiltracja leukocytów i zwłóknienie nerek po histologii UUO. Kortykalne skrawki nerkowe barwiono na leukocyty CD45 +. W 10 dni po UUO (a) leukocyty nagromadziły się w międzytrzonowej śródmiąższu w zatkanych nerkach w porównaniu z niezakłóconymi nerkami kontrolnymi (b). Leczenie BX471 od dnia 6 do 10 (c), jak również leczenie przez 10 dni (d), zmniejszone naciekanie leukocytów CD45-dodatnich w nerkach UUO w porównaniu z aib. Nie zanotowano redukcji w nerkach UUO myszy leczonych BX471 od dni 0 do 5 (nie pokazano). Nagromadzenie fibroblastów FSP1-pozytywnych w międzytrzonowej śródmiąższu 10 dni po UUO (e) było zmniejszone, gdy BX471 podawano przez 10 dni (f) i od dnia 6 do 10 (ostatnio nie pokazano). Kortykalne skrawki nerkowe zostały również srebrne, aby ocenić objętość śródmiąższową i odkładanie się tkanki włóknistej. Należy zauważyć wyraźne poszerzenie przestrzeni śródmiąższowej z odkładaniem się tkanki włóknistej w obszarach rozszerzonych kanalików w zatkanych nerkach po 10 dniach (g) w porównaniu z niezakłóconymi nerkami kontrolnymi (h) kontrolnych nośników. Leczenie za pomocą BX471 od dni 6 do 10 zmniejszonej objętości śródmiąższowej i osadzania matrycy (i), jak również leczenia BX471 przez 10 dni (j) w porównaniu z g. Nie zanotowano redukcji w nerkach UUO myszy leczonych BX471 w dniach 0-5 (nie pokazano). Rozwinięcie rurkowe i uszkodzenia komórek nabłonka rurkowego pozostały niezmienione we wszystkich grupach (oryginalne powiększenie × 400). Figura 6: Ekspresja receptora chemenu ReR po UUO [przypisy: fazy choroby alkoholowej, zapalenie stawów u dziecka, osobowość paranoiczna test ] [podobne: lekarz chorób wewnętrznych, gops jabłonna, 23 114 jabłonna ]