Antagonista receptora chemokin CCR-1 zmniejsza zwłóknienie nerek po jednostronnej podwiązaniu moczowodu ad 5

RT-PCR w czasie rzeczywistym wykonano przy użyciu całkowitego nerkowego RNA z zatkanymi (UUO) i przeciwległymi (CLK) nerkami od czterech do sześciu myszy 10 dni po podwiązaniu moczowodu. Poziomy ekspresji mRNA dla CCR1, CCR2 i CCR5 są wyrażane w odniesieniu do ekspresji mRNA GAPDH nerek, jak wskazano w Methods. Ekspresję w nerkach UUO myszy kontrolnych ustala się jako 1. (a) Znaczny wzrost mRNA dla wszystkich trzech receptorów odnotowano w nerkach UUO w porównaniu z CLK w kontrolnych podłożach. (b) Traktowanie BX471 przez 10 dni spowodowało znaczące zmniejszenie ekspresji mRNA CCR1 i CCR5 (odpowiednio P = 0,005 i P = 0,03) w porównaniu z nerkami UUO w kontrolach nośnika. W przypadku CCR2 różnica nie była znacząca (P = 0,07). * P <0,05. Figura 7 Ekspresja CCR2 i CCR5 na infiltrujących leukocytach. Analiza metodą cytometrii przepływowej ekspresji CCR2 (a) i CCR5 (b) na komórkach T izolowanych z zatkanych nerek i krwi myszy traktowanych BX471 i kontrolnych nośników. Leczenie za pomocą BX471 powoduje znaczne zmniejszenie liczby limfocytów CD8 + dodatnich pod względem CCR5, infiltrujących zatkane nerki oraz, w mniejszym stopniu, również w krwi obwodowej. Nie zaobserwowano żadnych znaczących zmian w przypadku komórek CD4 pozytywnych względem CCR5 lub komórek CCR2-pozytywnych w nerkach lub krwi od myszy traktowanych BX471 lub podłożem. Dot blots są reprezentatywne dla czterech do sześciu oddzielnych zestawów eksperymentów. Podane liczby to średnie z pięciu do dziewięciu myszy analizowanych w każdej grupie. Zwłóknienie. Jako komórkowy marker zwłóknienia ilość fibroblastów pozytywnych pod względem FSP1 oceniano za pomocą immunohistochemii. Dziesięć dni po tym, jak fibroblasty UUO nagromadziły się w międzytrzonowej śródmiąższu w obszarach zaznaczonego poszerzenia rurkowego (ryc. 4 i 5). Analiza morfometryczna wybarwionych srebrem odcinków nerkowych wykazała wyraźny wzrost objętości śródmiąższowej i odkładanie kolagenu w nerkach z zatkaniem w porównaniu z nieuporządkowanymi nerkami kontrolnymi (Figura 8). Stosując ilościowy RTT-PCR w czasie rzeczywistym TaqMan, stwierdzono również, że mRNA dla kolagenu I (1 ulegał zwiększeniu po UUO w porównaniu z nerkami kontrolnymi kontralateralnie (Figura 9). Aby potwierdzić wzrost ekspresji kolagenu, przeprowadziliśmy analizę Western blot ze specyficznym Ab dla kolagenu I (1. Dziesięć dni po zabiegu chirurgicznym zatkanych nerek kolagenu I ekspresja białka była znacznie zwiększona w porównaniu z kontrolą kontralateralną (ryc. 9). Rycina 8 Uszkodzenie histopatologiczne po UUO: dane morfometryczne. Analiza morfometryczna przekrojów kory mózgowej 10 dni po UUO w zatkanych nerkach (czarne słupki) i kontralateralne, pozbawione przeszkód nerki (białe słupki). Wartości to środki. SD zliczeń komórek na hpf. Należy zauważyć, że leczenie za pomocą BX471 przez 10 dni, a także od dni 6 do 10 znacząco zmniejszyło wskaźnik objętości śródmiąższowej i wskaźnik kolagenu w porównaniu z kontrolnymi nośnikami. BX471 podawany od 0 do 5 dnia nie miał wpływu na objętość śródmiąższową i wskaźnik kolagenu. Wskaźniki światła kanalikowego i uszkodzenia komórek rurkowych nie uległy zmianie w żadnym z reżimów leczenia. Figura 9 Morfologia kolagenu I i ekspresja białka. (a) Ekspresję mRNA kolagenu nerek określono metodą RT-PCR w czasie rzeczywistym. MRNA kolagenu I (3 analizowano jako stosunek do matrycy GAPDH i porównywano z niefachową nerką. Wyrażenie kolagenu I grupy nośnika ustawiono jako 1. Znaczący spadek mRNA kolagenu I (1 stwierdzono u zwierząt traktowanych BX471 (leczenie od dnia 0 do 10) w porównaniu z myszami leczonymi podłożem. (b) Poziomy kolagenu I określano za pomocą analizy Western blot. Ekstrakcje białek z dwóch zablokowanych (UUO) i dwóch nieprzysłoniętych przeciwległych nerek (CLK) myszy leczonych BX471 (ścieżki i 2) porównano z kontrolnymi nośnikami (ścieżki 3 i 4). Zwróć uwagę na wzrost ilości kolagenu I w UUO w porównaniu z nerkami CLK. Leczenie BX471 przez 10 dni zmniejszało ekspresję białka kolagenu I w nerkach UUO w porównaniu z nerkami kontrolnymi UUO. BX471 zmniejsza infiltrację leukocytów i zwłóknienie nerek po leukocytach infiltrujących UUO. Myszy traktowane 20 mg / kg antagonisty BX471 CCR1 przez 10 dni wykazywały zmniejszenie śródmiąższowych leukocytów CD45 dodatnich o około 55% w porównaniu z myszami leczonymi podłożem (Figury 4 i 5). Naciek cewkowo-śródmiąższowy limfocytów CD3-dodatnich i makrofagów F4 / 80-dodatnich zmniejszył się odpowiednio o 64% i 50% (Figura 4). Stosując analizę FACS izolowanych komórek infiltrujących, temu zmniejszeniu towarzyszyło znaczące zmniejszenie liczby komórek T CD8 dodatnich pod względem CCR5 w nerkach UUO myszy leczonych BX471 w porównaniu z nerkami w kontrolnych podłożach (44,2% w porównaniu z 64,3%, P = 0,007; 7). BX471 miał granicę istotnego wpływu na liczbę komórek CD8 dodatnich pod względem CCR5 we krwi obwodowej (11,3% [przypisy: fazy choroby alkoholowej, chipsy ziemniaczane z piekarnika, szczoteczka soniczna oral b ] [podobne: powiększanie biustu tłuszczem, chipsy ziemniaczane z piekarnika, szczoteczka soniczna oral b ]